א פלורעסאַנס פילטער איז אַ יקערדיק קאָמפּאָנענט אין פלואָרעססענסע מיקראָסקאָפּ.א טיפּיש סיסטעם האט דריי יקערדיק פילטערס: אַן עקסייטיישאַן פילטער, אַ ימישאַן פילטער און אַ דיקראָיק שפּיגל.זיי זענען קאַמאַנלי פּאַקידזשד אין אַ קוב אַזוי אַז די גרופּע איז ינסערטאַד צוזאַמען אין די מיקראָסקאָפּ.
ווי טוט אַ פלורעסאַנס פילטער אַרבעט?
עקסייטיישאַן פילטער
עקסייטיישאַן פילטערס טראַנסמיסיע ליכט פון אַ ספּעציפיש ווייוולענגט און פאַרשפּאַרן אנדערע ווייוולענגטס.זיי קענען זיין געניצט צו פּראָדוצירן פאַרשידענע פארבן דורך טונינג די פילטער צו לאָזן בלויז איין קאָליר דורך.די עקסייטיישאַן פילטערס קומען אין צוויי הויפּט טייפּס - לאַנג פאָרן פילטערס און באַנד פאָרן פילטערס.דער עקססיטער איז יוזשאַוואַלי אַ באַנדפּאַסס פילטער וואָס פּאַסיז בלויז די ווייוולענגטס אַבזאָרבד דורך די פלואָראָפאָר, אַזוי מינאַמייזינג עקסייטיישאַן פון אנדערע קוואלן פון פלואָרעססענסע און בלאַקינג עקסייטיישאַן ליכט אין די פלואָרעססענסע ימישאַן באַנד.ווי געוויזן דורך די בלוי שורה אין די פיגור, בפּ איז 460-495, וואָס מיטל אַז עס קענען בלויז פאָרן דורך די פלורעסאַנס פון 460-495 נם.
עס איז געשטעלט אין די ילומאַניישאַן דרך פון אַ פלורעסאַנס מיקראָסקאָפּ און פילטערס אויס אַלע ווייוולענגטס פון די ליכט מקור אַחוץ פֿאַר די פלואָראָפאָר עקסייטיישאַן קייט.די פילטער מינימום טראַנסמיסיע דיקטייץ די ברייטנאַס און העלקייַט פון בילדער.א מינימום פון 40% טראַנסמיסיע פֿאַר קיין עקסייטיישאַן פילטער איז רעקאַמענדיד אַזוי אַז די טראַנסמיסיע איז יידילי> 85%.די באַנדווידט פון די עקסייטיישאַן פילטער זאָל זיין לעגאַמרע ין די פלואָראָפאָר עקסייטיישאַן קייט אַזוי אַז די צענטער ווייוולענגט (CWL) פון די פילטער איז ווי נאָענט ווי מעגלעך צו די שפּיץ עקסייטיישאַן ווייוולענגט פון די פלואָראָפאָר.די עקסייטיישאַן פילטער אָפּטיש געדיכטקייַט (אָד) דיקטייץ די הינטערגרונט בילד פינצטערניש;OD איז אַ מאָס פון ווי געזונט אַ פילטער בלאַקס די ווייוולענגטס אַרויס פון טראַנסמיסיע קייט אָדער באַנדווידט.א מינימום אָד פון 3.0 איז רעקאַמענדיד, אָבער אַ אָד פון 6.0 אָדער העכער איז ידעאַל.
ימישאַן פילטער
ימישאַן פילטערס דינען דעם ציל פון אַלאַוינג די דיזייראַבאַל פלואָרעססענסע פון די מוסטער צו דערגרייכן די דיטעקטער.זיי פאַרשפּאַרן קירצער ווייוולענגטס און האָבן הויך טראַנסמיסיע פֿאַר מער ווייוולענגטס.די פילטער טיפּ איז אויך פארבונדן מיט אַ נומער, למשל BA510IF אין די פיגור (ינטערפיראַנס שלאַבאַן פילטער), אַז באַצייכענונג רעפערס צו די ווייוולענגט ביי 50% פון זייַן מאַקסימום טראַנסמיסיע.
די זעלבע רעקאַמאַנדיישאַנז פֿאַר עקסייטיישאַן פילטערס זענען אמת פֿאַר ימישאַן פילטערס: מינימום טראַנסמיסיע, באַנדווידט, OD און CWL.אַן ימישאַן פילטער מיט די ידעאַל CWL, מינימום טראַנסמיסיע און OD קאָמבינאַציע גיט די העלסטע מעגלעך בילדער, מיט די דיפּאַסט מעגלעך בלאַקינג, און ינשורז די דיטעקשאַן פון די פיינאַסט ימישאַן סיגנאַלז.
דיטשראָיק שפּיגל
די דיקראָיק שפּיגל איז געשטעלט צווישן די עקסייטיישאַן פילטער און ימישאַן פילטער אין אַ 45 ° ווינקל און ריפלעקס די עקסייטיישאַן סיגנאַל צו די פלואָראָפאָר בשעת טראַנסמיטינג די ימישאַן סיגנאַל צו די דיטעקטער.ידעאַל דיקראָיק פילטערס און שטראַל ספּליטטערס האָבן שאַרף טראַנזישאַנז צווישן מאַקסימום אָפּשפּיגלונג און מאַקסימום טראַנסמיסיע, מיט אַ> 95% אָפּשפּיגלונג פֿאַר די באַנדווידט פון די עקסייטיישאַן פילטער און אַ טראַנסמיסיע פון> 90% פֿאַר די באַנדווידט פון די ימישאַן פילטער.סעלעקטירן דעם פילטער מיט די ינטערסעקשאַן ווייוולענגט (λ) פון די פלואָראָפאָר אין זינען, צו מינאַמייז בלאָנדזשען-ליכט און מאַקסאַמייז די פלורעסאַנט בילד סיגנאַל-צו-ראַש פאַרהעלטעניש.
די דיקראָיק שפּיגל אין דעם פיגור איז די DM505, אַזוי געהייסן ווייַל 505 נאַנאָמעטערס איז די ווייוולענגט ביי 50% פון די מאַקסימום טראַנסמיסיע פֿאַר דעם שפּיגל.די טראַנסמיסיע ויסבייג פֿאַר דעם שפּיגל ווייזט הויך טראַנסמיסיע העכער 505 נם, אַ אַראָפאַנג קאַפּ אין טראַנסמיסיע צו די לינקס פון 505 נאַנאָמעטערס, און מאַקסימום רעפלעקטיוויטי צו די לינקס פון 505 נאַנאָמעטער אָבער נאָך קען האָבן עטלעכע טראַנסמיסיע אונטער 505 נם.
וואָס איז די חילוק צווישן לאַנג פאָרן און באַנד פאָרן פילטערס?
פלואָרעססענסע פילטערס קענען זיין צעטיילט אין צוויי טייפּס: לאַנג פאָרן (לפּ) און באַנד פאָרן (בפּ).
לאנג פאָרן פילטערס יבערשיקן לאַנג ווייוולענגטס און פאַרשפּאַרן די קירצער אָנעס.די דורכשניט-אויף ווייוולענגט איז די ווערט ביי 50% פון שפּיץ טראַנסמיסיע, און אַלע ווייוולענגטס העכער די דורכשניט-אויף זענען טראַנסמיטטעד דורך די לאַנג פאָרן פילטערס.זיי זענען אָפט געניצט אין דיטשראָיק מירערז און ימישאַן פילטערס.לאָנגפּאַסס פילטערס זאָל זיין גענוצט ווען די אַפּלאַקיישאַן ריקווייערז מאַקסימום ימישאַן זאַמלונג און ווען ספּעקטראַל דיסקרימינאַציע איז נישט דיזייעראַבאַל אָדער נייטיק, וואָס איז בכלל דער פאַל פֿאַר פּראָבעס וואָס דזשענערייט אַ איין ימיטינג מינים אין ספּעסאַמאַנז מיט לעפיערעך נידעריק לעוועלס פון אַוטאָפלאָרעסענסע אין הינטערגרונט.
באַנד פאָרן פילטערס בלויז יבערשיקן אַ זיכער ווייוולענגט באַנד און פאַרשפּאַרן אנדערע.זיי רעדוצירן קראָססטאַלק דורך אַלאַוינג בלויז די סטראָנגעסט טייל פון די פלואָראָפאָר ימישאַן ספּעקטרום צו זיין טראַנסמיטטעד, רעדוצירן אַוטאָפלואָרעסענסע ראַש און אַזוי פֿאַרבעסערן די סיגנאַל-צו-ראַש פאַרהעלטעניש אין הויך הינטערגרונט אַוטאָפלאָרעסענסע סאַמפּאַלז, וואָס לאַנג פאָרן פילטערס קענען נישט פאָרשלאָגן.
ווי פילע טייפּס פון פלואָרעססענסע פילטער שטעלט בעסטסקאָפּע קענען צושטעלן?
עטלעכע פּראָסט טייפּס פון פילטערס אַרייַננעמען בלוי, גרין און אַלטראַווייאַליט פילטערס.ווי געוויזן אין די טיש.
| פילטער שטעלן | עקסייטיישאַן פילטער | דיטשראָיק שפּיגל | באַריער פילטער | געפירט לאָמפּ וואַווע לענג | אַפּפּליקאַטיאָן |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | · FITC: פלורעסאַנט אַנטיבאָדי אופֿן ·אַסידינע מאַראַנץ: דנאַ, רנאַ · אַוראַמינע: טובערקלע באַסילוס ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | · Rhodamine, TRITC: פלורעסאַנט אַנטיבאָדי אופֿן · פּראָפּידיום יאָדידע: דנאַ ·רפפּ |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · אַוטאָ-פלאָרעסענסע אָבסערוואַציע · דאַפּי: דנאַ סטיינינג ·Hoechest 332528, 33342: געניצט פֿאַר טשראָמאָסאָם סטיינינג |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · קאַטהאָלאַמינעס · 5-כיידראָקסי טריפּטאַמינע · טעטראַסיקלינע: סקעלעט, ציין |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | ·סי5 ·אַלעקסאַ פלואָר 633, אַלעקסאַ פלואָר 647 |
פילטער שטעלט וואָס זענען געניצט אין פלואָרעססענסע אַקוואַזישאַנז זענען דיזיינד אַרום די הויפּט ווייוולענגטס געניצט אין פלואָרעססענסע אַפּלאַקיישאַנז, וואָס איז באזירט אויף די מערסט געוויינט פלואָראָפאָרעס.פֿאַר דעם סיבה, זיי זענען אויך געהייסן נאָך די פלואָראָפאָר זיי זענען בדעה פֿאַר ימידזשינג, אַזאַ ווי DAPI (בלוי), FITC (גרין) אָדער TRITC (רויט) פילטער קיובז.
| פילטער שטעלן | עקסייטיישאַן פילטער | דיטשראָיק שפּיגל | באַריער פילטער | געפירט לאָמפּ וואַווע לענג |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | בפּ528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| טעקסאַס רויט | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| מטשערי | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
ווי טאָן איר קלייַבן אַ פלורעסאַנס פילטער?
1. דער פּרינציפּ פון סאַלעקטינג פלואָרעססענסע פילטער איז צו לאָזן די פלואָרעססענסע / ימישאַן ליכט פאָרן דורך די ימידזשינג סוף ווי ווייַט ווי מעגלעך, און גאָר פאַרשפּאַרן די עקסייטיישאַן ליכט אין דער זעלביקער צייַט, אַזוי צו באַקומען די העכסטן סיגנאַל-צו-ראַש פאַרהעלטעניש.ספּעציעל פֿאַר די אַפּלאַקיישאַן פון מולטיפאָטאָאָן עקסייטיישאַן און גאַנץ ינערלעך אָפּשפּיגלונג מיקראָסקאָפּ, די שוואַך ראַש וועט אויך פאַרשאַפן גרויס ינטערפיראַנס צו די ימידזשינג ווירקונג, אַזוי די פאָדערונג פֿאַר סיגנאַל צו ראַש פאַרהעלטעניש איז העכער.
2. וויסן די עקסייטיישאַן און ימישאַן ספּעקטרום פון די פלואָראָפאָר.צו בויען אַ פלואָרעססענסע פילטער שטעלן וואָס דזשענערייץ אַ הויך-קוואַליטעט, הויך-קאַנטראַסט בילד מיט אַ שוואַרץ הינטערגרונט, עקסייטיישאַן און ימישאַן פילטערס זאָל דערגרייכן הויך טראַנסמיסיע מיט מינימאַל פּאַסבאַנד ריפּאַל איבער די געגנטן וואָס שטימען צו די פלואָראָפאָר עקסייטיישאַן פּיקס אָדער ימישאַנז.
3. באַטראַכטן די געווער פון פלורעסאַנס פילטערס.די פילטערס מוזן זיין ימפּערוויאַס צו טיף ליכט קוואלן וואָס דזשענערייט אַלטראַווייאַליט (UV) ליכט וואָס קען פירן צו "בערנאָוט", ספּעציעל פון די עקססיטער פילטער ווייַל עס איז אונטערטעניק צו די פול ינטענסיטי פון די ילומאַניישאַן מקור.
די פאַרשידענע פלורעסאַנט מוסטער בילדער
די רעסורסן זענען געזאמלט און אָרגאַניזירט אויף דער אינטערנעץ, און זענען בלויז געניצט פֿאַר לערנען און קאָמוניקאַציע.אויב עס איז קיין ינפרינדזשמאַנט, ביטע קאָנטאַקט אונדז צו ויסמעקן.
פּאָסטן צייט: דעצעמבער 09-2022